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項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:在中國(guó)癌癥發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì)，癌癥的治療效果不令人滿意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見效快的特點(diǎn)，在臨床已表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)，能顯著改善患者的生存質(zhì)量和延長(zhǎng)患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應(yīng)用面臨兩個(gè)主要問題，一是靶向藥物的適用性問題，其治療效果與患者的基因突變類型密切相關(guān)，需要通過腫瘤患者的基因突變檢測(cè)來篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問題，一般靶向藥物使用幾個(gè)月即可出現(xiàn)耐藥，可能產(chǎn)生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對(duì)少數(shù)患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測(cè)來指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化治療，并且在治療過程中通過對(duì)耐藥基因的檢測(cè)了解靶向藥物的療效變化進(jìn)一步指導(dǎo)靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時(shí)可避免無效用藥，節(jié)約社會(huì)成本。顯然采用靶向藥物的個(gè)性化治療方案可使患者受益最多，但受現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實(shí)現(xiàn)。由于目前的基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測(cè)標(biāo)本，但很多晚期癌癥病人不適合手術(shù)治療無法獲取組織樣本，而細(xì)針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對(duì)于手術(shù)患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監(jiān)測(cè)過程中會(huì)出現(xiàn)無樣可取的情況；同時(shí)由于檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，現(xiàn)有技術(shù)只能進(jìn)行單一突變檢測(cè)，不能同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，由于突變種類較多，臨床檢測(cè)操作繁瑣，工作量較大。本項(xiàng)目針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的缺點(diǎn)進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測(cè)技術(shù)使基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性較現(xiàn)有技術(shù)提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測(cè)對(duì)象，并且可同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，簡(jiǎn)化了操作流程，節(jié)約了成本。 本項(xiàng)目的目的是開發(fā)可以血液和組織樣品為檢測(cè)對(duì)象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測(cè)試劑盒，用于臨床指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化用藥，并將其推廣應(yīng)用。應(yīng)用范圍:與目前存在的基因突變檢測(cè)技術(shù)相比，本項(xiàng)目所采用的檢測(cè)技術(shù)具有更廣泛的適用性。本項(xiàng)目所采用的技術(shù)以病人血液為主要檢測(cè)標(biāo)本，可適用于所有肺癌和結(jié)直腸癌病人。由于具有高度的靈敏度和特異性，可在高野生型基因背景下進(jìn)行檢測(cè)，解除了傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)對(duì)病人標(biāo)本的限制。血液標(biāo)本采樣簡(jiǎn)單方便，與手術(shù)穿刺相比，極大的減輕了病人痛苦，也降低了取樣的成本，更容易得到病人的配合。對(duì)于繼發(fā)性耐藥的病人而言，使動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)檢測(cè)耐藥基因稱為可能。項(xiàng)目階段:試驗(yàn)階段效益分析:與目前存在的基因突變檢測(cè)技術(shù)相比，本項(xiàng)目研究采用的基因突變檢測(cè)技術(shù)具有更高的靈敏度和特異性，靈敏度可達(dá)到0.1％，即可在大于103個(gè)野生型基因的背景下檢測(cè)到一個(gè)突變基因。本項(xiàng)目研究已在基因突變檢測(cè)方面積累了一定經(jīng)驗(yàn)，已完成了對(duì)EGFR和K-ras基因檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室研發(fā)工作，前期的研究結(jié)果顯示，采用本項(xiàng)目的技術(shù)方法檢測(cè)EGFR 29種常見突變和K-ras基因8種常見的突變至少可達(dá)到0.1%的檢測(cè)選擇性，具有高度的靈敏度和特異性，并且可在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)8種類型K-ras點(diǎn)突變，這是目前其他ARMS技術(shù)所無法達(dá)到的。并且采用本項(xiàng)目技術(shù)，我們進(jìn)一步研發(fā)了針對(duì)肺癌和結(jié)直腸癌靶向治療的EGFR C797S、braf、PIK3CA等突變檢測(cè)的試劑盒，其中EGFR C797S突變檢測(cè)試劑盒目前尚無上市產(chǎn)品，C797S為靶向藥物治療過程中產(chǎn)生的突變，可用于靶向藥物的耐藥監(jiān)測(cè)，以便及時(shí)指導(dǎo)病人改變治療方案。

產(chǎn)品種類：營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞DNA單獨(dú)提取試劑盒、營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞及芽胞DNA共同提取試劑盒、營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞及芽胞DNA分別提取試劑盒三個(gè)系列。 產(chǎn)品用途：人及動(dòng)物體糞便中細(xì)菌及芽胞DNA的提取與分離。 產(chǎn)品特點(diǎn)：不需要使用有毒的苯酚等試劑、快速，簡(jiǎn)捷，整個(gè)細(xì)菌樣品操作過程可在1個(gè)小時(shí)內(nèi)完成、結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高。OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)50kb～150kb，可直接用于PCR，Southern-blot，文庫(kù)構(gòu)建和各種酶切反應(yīng)。共同開發(fā)單位：江蘇師范大學(xué)江蘇省藥用植物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、無錫靈特生物技術(shù)有限公司。

宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，在女性人群中HPV的感染率在13.5%左右。分子診斷是指應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測(cè)患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化而做出診斷的技術(shù)。免疫診斷（immunodiagnosis）是應(yīng)用免疫學(xué)的理論、技術(shù)和方法診斷各種疾病和測(cè)定免疫狀態(tài)。但現(xiàn)有單克隆抗體均無法達(dá)到HPV亞型鑒別目的，若干亞型特異性抗體均與其它亞型有交叉反應(yīng)。迄今為止市場(chǎng)上沒有高危型HPV免疫診斷試劑盒。因此我們開發(fā)的HPV免疫診斷試劑盒有望成為第一個(gè)高危HPV免疫檢測(cè)試劑盒。

項(xiàng)目研發(fā)背景及意義 根據(jù)中國(guó)人口協(xié)會(huì)、國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)育齡夫婦的不孕不育率近年來已高達(dá)12%-15%，患者人數(shù)超過5000萬。其中，女性因素占比50%，男性因素占比40%，夫婦雙方共同原因占比10%。隨著環(huán)境污染、生育年齡推遲、生活壓力等原因，不孕不育夫婦數(shù)量還在不斷增加。 受中國(guó)傳統(tǒng)觀念影響，現(xiàn)階段不孕不育檢查主要以女性檢測(cè)為主，男性檢測(cè)指標(biāo)只有精液常規(guī)等基本指標(biāo)。但研究表明，在男性不育人群中，仍有15%的患者精液常規(guī)檢測(cè)結(jié)果正常。精液常規(guī)分析僅能反映48%男性的生育能力，并不能很好地預(yù)測(cè)精子的受精能力和妊娠結(jié)局，因此臨床迫切需要引入一些新的檢測(cè)指標(biāo)來正確評(píng)估精子功能，更準(zhǔn)確得預(yù)測(cè)精子的受精能力和妊娠結(jié)局。 已有的研究結(jié)果表明，精子受精過程中最為重要的三個(gè)功能指標(biāo)能更加全面地反映男性生育力，包括：精子持續(xù)運(yùn)動(dòng)潛能（線粒體功能）、精子穿過透明帶的能力（頂體功能）和受精后胚胎發(fā)育潛能（精子DNA碎片）： 1.精子線粒體為精子運(yùn)動(dòng)提供能量，線粒體功能異常會(huì)直接導(dǎo)致精子持續(xù)運(yùn)動(dòng)能力下降，進(jìn)而影響精子穿越子宮、到達(dá)輸卵管與卵子結(jié)合； 2.精子頂體協(xié)助精子穿過透明帶，頂體功能的正常與否直接決定精子的授精能力； 3.精子提供了一半的遺傳物質(zhì)（DNA），其完整與否可影響到受精卵原核的形成、受精卵卵裂能力、早期胚胎著床能力、后續(xù)胚胎的正常發(fā)育潛力及子代的健康。 上述指標(biāo)異常，臨床上可導(dǎo)致不育、反復(fù)流產(chǎn)和助孕治療成功率低等病癥。除此之外，近年來也出現(xiàn)了一些新的精液質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，成為關(guān)注的熱點(diǎn)，包括：精子活性氧水平、精子質(zhì)膜完整性： 1.精子細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平對(duì)精子核DNA的完整性、精子線粒體功能等均有影響，間接影響著精子細(xì)胞的損傷程度、精液質(zhì)量、受精能力以及男性生育力； 2.精子質(zhì)膜的完整性可以很好地反映精子的存活率，活精子是完成受精過程的前提。 上述指標(biāo)異常，是導(dǎo)致精液質(zhì)量下降、男性生育力降低的重要原因。因此，精液檢測(cè)指標(biāo)的增加有助于臨床更全面地評(píng)價(jià)男性精液質(zhì)量、預(yù)測(cè)男性生育力，并提出適合的治療方案或輔助生殖方案。   項(xiàng)目?jī)?nèi)容與創(chuàng)新性 在復(fù)旦大學(xué)云鋒基金的支持下，復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院呂旭楠與青島復(fù)諾生物醫(yī)療有限公司合作研發(fā)了精子DNA碎片、精子誘發(fā)頂體反應(yīng)、精子線粒體膜電位、精子活性氧類物質(zhì)（包括過氧化物和超氧化物）、精子質(zhì)膜通透性等一系列用于檢測(cè)男性生育力評(píng)價(jià)新指標(biāo)的體外診斷試劑，基于流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)方法，擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，實(shí)現(xiàn)了臨床應(yīng)用所需的穩(wěn)定性、便捷性、準(zhǔn)確性和高效性。 本項(xiàng)目在整體實(shí)施過程中實(shí)現(xiàn)了以下創(chuàng)新： ① 計(jì)算機(jī)學(xué)科創(chuàng)新。本項(xiàng)目實(shí)現(xiàn)了三指標(biāo)均能匹配專用的數(shù)據(jù)分析軟件，經(jīng)過近千例大樣本量的算法設(shè)計(jì)和AI自我學(xué)習(xí)校準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)了一鍵化結(jié)果分析和報(bào)告管理。不再依賴傳統(tǒng)的肉眼辨別和手動(dòng)框圖計(jì)算，減少了人為誤差，提升了結(jié)果的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。本項(xiàng)目軟件均已取得軟件著作權(quán)證書，結(jié)果圖示展示如下： ② 生物技術(shù)學(xué)科創(chuàng)新。本項(xiàng)目?jī)?yōu)化了染料選擇和分組設(shè)計(jì)，其中頂體指標(biāo)采用獨(dú)特的雙染法設(shè)計(jì)，規(guī)避了過去需要新鮮樣本、且樣本需要優(yōu)選的冗雜過程，更符合臨床和實(shí)驗(yàn)室開展的實(shí)際需求。本項(xiàng)目方法的創(chuàng)新使得原本單項(xiàng)目的檢測(cè)時(shí)間從3小時(shí)縮短至15分鐘，三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)檢時(shí)間20分鐘，其中手工操作僅需5分鐘，在國(guó)際上處于領(lǐng)先水平。這一突破從根本上解決了實(shí)驗(yàn)室因原技術(shù)手段耗時(shí)長(zhǎng)、費(fèi)人工、操作復(fù)雜而難以開展的技術(shù)問題，造成臨床報(bào)告周期長(zhǎng)、受檢者取報(bào)告不便的難題。該項(xiàng)技術(shù)創(chuàng)新目前獲得發(fā)明專利授權(quán)。 ③ 生物技術(shù)學(xué)科創(chuàng)新。本項(xiàng)目完全采用流式細(xì)胞儀的方法進(jìn)行檢測(cè)，替代了傳統(tǒng)的熒光顯微鏡法，單樣本檢測(cè)覆蓋的細(xì)胞數(shù)量多（約5000個(gè)），降低了系統(tǒng)誤差，提高了準(zhǔn)確度，提高了自動(dòng)化程度和可重復(fù)性。   項(xiàng)目進(jìn)展與取得成效 本項(xiàng)目目前已完成科研轉(zhuǎn)化，取得醫(yī)療器械監(jiān)督管理部門的審批，獲得生產(chǎn)許可，具備臨床合規(guī)銷售的資格。市場(chǎng)推廣方面，除選擇原有的醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心作為合作伙伴外，還發(fā)起了與精子庫(kù)的聯(lián)合研究。現(xiàn)階段，本項(xiàng)目已取得以下成績(jī)： 1.臨床方面：目前，本項(xiàng)目已在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院、南京鼓樓醫(yī)院等多家三級(jí)及以上醫(yī)院開展合作。 2.精子庫(kù)方面：本項(xiàng)目單位已與國(guó)家衛(wèi)健委出生缺陷與生殖健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建成生殖健康聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，共同申報(bào)國(guó)家十四五計(jì)劃生殖健康領(lǐng)域重點(diǎn)項(xiàng)目，擬對(duì)精子庫(kù)精子進(jìn)行更真實(shí)全面的篩選和評(píng)估，預(yù)計(jì)將為精子庫(kù)精子的受孕成功率提升十個(gè)百分點(diǎn)，致力于為適齡不孕不育人群解決生育難題，為可生育人群實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。

在中國(guó)癌癥發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì)，癌癥的治療效果不令人滿意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見效快的特點(diǎn)，在臨床已表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)，能顯著改善患者的生存質(zhì)量和延長(zhǎng)患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應(yīng)用面臨兩個(gè)主要問題，一是靶向藥物的適用性問題，其治療效果與患者的基因突變類型密切相關(guān)，需要通過腫瘤患者的基因突變檢測(cè)來篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問題，一般靶向藥物使用幾個(gè)月即可出現(xiàn)耐藥，可能產(chǎn)生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對(duì)少數(shù)患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測(cè)來指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化治療，并且在治療過程中通過對(duì)耐藥基因的檢測(cè)了解靶向藥物的療效變化進(jìn)一步指導(dǎo)靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時(shí)可避免無效用藥，節(jié)約社會(huì)成本。顯然采用靶向藥物的個(gè)性化治療方案可使患者受益最多，但受現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實(shí)現(xiàn)。由于目前的基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測(cè)標(biāo)本，但很多晚期癌癥病人不適合手術(shù)治療無法獲取組織樣本，而細(xì)針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對(duì)于手術(shù)患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監(jiān)測(cè)過程中會(huì)出現(xiàn)無樣可取的情況；同時(shí)由于檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，現(xiàn)有技術(shù)只能進(jìn)行單一突變檢測(cè)，不能同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，由于突變種類較多，臨床檢測(cè)操作繁瑣，工作量較大。本項(xiàng)目針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的缺點(diǎn)進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測(cè)技術(shù)使基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性較現(xiàn)有技術(shù)提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測(cè)對(duì)象，并且可同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，簡(jiǎn)化了操作流程，節(jié)約了成本。 本項(xiàng)目的目的是開發(fā)可以血液和組織樣品為檢測(cè)對(duì)象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測(cè)試劑盒，用于臨床指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化用藥，并將其推廣應(yīng)用。

本項(xiàng)目產(chǎn)品為一種利用精漿piRNA作為生物標(biāo)志物檢測(cè)男性生殖功能障礙的體外診斷試劑盒，可用于男性不育的早期診斷、輔助診斷及預(yù)后判斷等。本項(xiàng)目產(chǎn)品具有檢出率高、早期性、靈敏性等特點(diǎn)，可應(yīng)用于各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)的男性生殖功能障礙臨床診斷。

藥物活性與毒性篩選試劑盒是李紅玉教授團(tuán)隊(duì)經(jīng)歷 15 年研發(fā)的一種快速，簡(jiǎn)便，高效檢測(cè)藥品或健康食品活性與毒性篩選試劑盒。該技術(shù)利用國(guó)際認(rèn)可的能夠反映體內(nèi)活性與毒性的模式生物秀麗隱桿線蟲作為篩選工具，配合特殊染料，能夠快速檢測(cè)受試品活性與毒性，也可利用該技術(shù)對(duì)藥品進(jìn)行二次開發(fā)。具有獨(dú)立自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，已成功申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利 5 項(xiàng)，美國(guó)專利 1 項(xiàng)。已為甘肅東方天潤(rùn)公司和上海中華藥業(yè)提供優(yōu)質(zhì)服務(wù)，并成功完成藥品，化合物，保健食品的活性開發(fā)。該技術(shù)可以為藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)，制藥企業(yè)，醫(yī)藥研究院所，化合物合成機(jī)構(gòu)

產(chǎn)品詳細(xì)介紹參考單價(jià)：106.00 元型號(hào)規(guī)格：載玻片、蓋玻片、洋紅、昆蟲針、鏡頭紙、吸水紙、濾紙、雙面刀片、碘液、龍膽紫溶液等到3種實(shí)驗(yàn)易耗品。每盒供第二種方案配備的學(xué)校初中兩面年用量生產(chǎn)廠商：技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)：登記時(shí)間：2003年4月1日產(chǎn)品描述：

產(chǎn)品詳細(xì)介紹參考單價(jià)：245.00 元型號(hào)規(guī)格：蘇丹Ⅲ染液、亞甲基藍(lán)溶液、甲基綠染液、淀粉酶、生長(zhǎng)素、甲狀腺片、甲硫咪唑、毛細(xì)管、半透膜、載玻片、蓋玻片、吸水紙等。每盒供第二種配備方案高中一年用量生產(chǎn)廠商：技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)：登記時(shí)間：2003年4月1日產(chǎn)品描述：