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成果描述：采用高效預(yù)處理、低溫酶萃取、鹽析和膜分離等成套技術(shù)，從新鮮動物皮、魚皮、魚鱗等不同原料中制備未變性膠原蛋白，解決了獲取大量高純度、未變性的化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原的技術(shù)難題；掌握了通過物理與化學(xué)改性手段調(diào)控未變性膠原的熱穩(wěn)定性、流變學(xué)等性能的方法和原理，為未變性化妝品用和醫(yī)用膠原的產(chǎn)業(yè)化利用提供了技術(shù)支撐。目前，化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原蛋白生產(chǎn)技術(shù)已分別在成都新際生物活性膠原開發(fā)有限公司和廣東勝馳生物科技有限公司成功實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)與天然膠原標(biāo)準(zhǔn)品一致，經(jīng)濟效益顯著，具有較強的市場競爭力。市場前景分析：生物活性膠原即未變性膠原，具有三股螺旋結(jié)構(gòu)，分子量為30萬，能夠促進細胞生長、可生物降解，且生物相容性與機械力學(xué)性能良好，已廣泛用于美容護膚、組織工程等領(lǐng)域。膠原作為一種高技術(shù)含量的生物材料在生物醫(yī)學(xué)、化妝品等領(lǐng)域具有巨大的潛在市場。首先生物活性膠原作為一種生物材料本身具有無限的生命力，是全世界科學(xué)家都在研究開發(fā)的新型材料之一，國內(nèi)當(dāng)前處于探索性開發(fā)階段，因此只要抓住這個先機將來就可以獲得良好的回報；其次生物活性膠原的深加工產(chǎn)品擁有巨大的消費群體，這主要是由于生物活性膠原具有其它化妝品的活性成分所無可比擬的增強皮膚彈性，祛除細小皺紋，優(yōu)良的保濕、護膚的確切效果，先期投入的第一代產(chǎn)品已被市場認(rèn)可。目前，本項目的先期產(chǎn)品技術(shù)已在成都、廣東的2家公司實現(xiàn)生物活性膠原原料的產(chǎn)業(yè)化，制備的精華液、面膜、眼貼膜等護膚產(chǎn)品市場反應(yīng)效果良好，作為醫(yī)用膠原海綿、骨修復(fù)材料的原料也即將投入市場，產(chǎn)品市場仍存在很大的開拓空間。與同類成果相比的優(yōu)勢分析：化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原液體（4mg/mL）每毫升售價約為20元，而生產(chǎn)成本每毫升僅約為2元，因此每公斤生物活性膠原液體的利潤為1.8萬元。可見，本項目技術(shù)生產(chǎn)的未變性膠原功能材料具有很大的利潤空間，經(jīng)濟效益非常顯著，具有很強的市場競爭力。

該藥物來源于病原生物資源的天然多肽（血吸 蟲蛋白），具有明顯抑制IL-12產(chǎn)生、上調(diào)IL-10表達和調(diào)節(jié)性T細胞的生物學(xué)功能，為研制新型免疫抑制 劑提供了一種新的先導(dǎo)分子，進一步的發(fā)展研究將具有良好的社會和經(jīng)濟效益。

本發(fā)明公開了一種絲蛋白組合液涂復(fù)滌綸織物的方法,包括:將滌綸織物放入NAOH溶液、乙二胺溶液、表面活性劑1227溶液的混合溶液中,進行滌綸織物表面的化學(xué)刻蝕減量處理;再用清水洗至中性;或先用乙酸中和后,再用清水洗至中性;然后將滌綸織物放入絲蛋白組合液中,浸漬處理;然后用無水乙醇或120℃水蒸氣進行結(jié)晶化處理;熱水中洗滌;脫水干燥,即獲得絲蛋白組合液涂復(fù)滌綸織物。本發(fā)明利用絲蛋白溶液對滌綸織物進行功能改性處理,改善了滌綸織物的吸濕性和服用性,提高了滌綸織物的檔次和附加值;通過化學(xué)刻蝕減量處理方法,開發(fā)了一種新型的具有保健功能的蠶絲蛋白涂復(fù)滌綸織物面料,特別是吸濕性提高3倍以上,具有抗靜電性。

G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）家族是最大的一類膜蛋白家族受體，在視覺，嗅覺，味覺以及激素和神經(jīng)遞質(zhì)等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮著重要的生理功能，同時也是關(guān)鍵的藥物靶標(biāo)。近年來，隨著越來越多GPCR在失活和激活狀態(tài)下的晶體及電鏡結(jié)構(gòu)的解析，人們對于這一大類受體的激活機制有了愈發(fā)深入的了解。然而，GPCR受體的失活和激活結(jié)構(gòu)僅代表了信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程起始和終止時相對穩(wěn)定的構(gòu)象狀態(tài)，受體在激活過程中發(fā)生了復(fù)雜多樣的動態(tài)構(gòu)象變化，這些變化很可能與不同配體引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)多樣性相關(guān)。目前，GPCR在激活過程中的動態(tài)構(gòu)象變化仍不清楚，國際上這方面的研究尚處于起步階段。液體核磁共振方法能夠在原子分辨率水平研究蛋白質(zhì)相互作用和構(gòu)象變化，提供晶體或電鏡結(jié)構(gòu)缺失的信息，是GPCR動態(tài)結(jié)構(gòu)與激活機制研究中不可缺少的重要研究手段。 M2毒蕈堿型乙酰膽堿受體（M2R）是一個典型的GPCR，在調(diào)節(jié)人體心率和許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能中發(fā)揮重要作用，是研究GPCR 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)以及藥物設(shè)計的模式受體。該項研究通過在M2R中引入13CH3-ε-甲硫氨酸同位素標(biāo)記探針，檢測受體在結(jié)合一系列配體小分子時的核磁圖譜變化（圖一），分析M2R動態(tài)構(gòu)象變化與這些配體對G蛋白激活和抑制蛋白 （arrestin）招募效應(yīng)差異的相關(guān)性。同時，結(jié)合分子動力學(xué)模擬實驗進一步解釋不同配體結(jié)合導(dǎo)致受體激活時構(gòu)象和功能變化差異的分子機制。該項研究首次將M2R的配體結(jié)構(gòu)、受體構(gòu)象變化以及配體功能多樣性聯(lián)系起來，揭示了M2R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)多樣性可能的分子機制，并為針對這類重要受體的藥物研發(fā)提供了理論指導(dǎo)。

高效的 多肽 - 多肽偶聯(lián)反應(yīng)對于 制備蛋白 - 藥物綴合物、調(diào)控蛋白質(zhì)拓撲結(jié)構(gòu)、生物成像 、化學(xué)生物學(xué) 等 領(lǐng)域 具有重要的意義 ，并因其可基因編碼的特性 而 備受關(guān)注 。目前， 研究 報道 此類連接方法 并不太多 見 ，其中 分選酶（ sortase ） 或 蝶豆粘酶 -1 （ butelase 1 ） 介導(dǎo)的偶聯(lián)反應(yīng)具有較好的底物 序列特異性 ， 內(nèi)含肽 （ intein ） 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)連接方法 可實現(xiàn) 可基因編碼的高效主鏈連接， 而 轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶 （ transglutaminase ） 則 可以 介導(dǎo) 非特異性的 側(cè)鏈異肽鍵 偶聯(lián) 。近年來 ， 多肽 - 蛋白質(zhì)反應(yīng)對 的 蓬勃發(fā)展 為此類工具 的 發(fā)展 提供了新的契機 。 已 有 諜連接酶（ SpyLigase ）和探連接酶（ SnoopLigase ） 介導(dǎo) 的多肽 - 多肽偶聯(lián)體系 見諸報道 ，但其效率仍 有 待提高， 而 其 細 胞內(nèi)的應(yīng)用前景仍有待探索。 最近 ， 張文彬課題組發(fā)展了 獨特的具有無序結(jié)構(gòu)的 諜訂書機 酶 （ SpyStapler ），可實現(xiàn) 諜標(biāo)簽 （ SpyTag ）和北大 標(biāo)簽 （ BDTag ）在 細 胞內(nèi)和 細 胞外的高效偶聯(lián) （圖 1 ） 。

相對于人類病原微生物，生物防微生物與宿主互作的分子機理研究起步較晚。對殺蟲防病功能蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能進行分析，不僅對揭示這些蛋白分子的作用機理具有重要意義，同時也是構(gòu)建新型高效廣譜微生物農(nóng)藥的基礎(chǔ)。本項目選擇我國分離的蘇云金芽胞桿菌中具有自主知識產(chǎn)權(quán)的重要的殺蟲功能基因，通過解析其蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和開展生物學(xué)功能研究，揭示這些蛋白質(zhì)的分子作用機理。同時進行蛋白與昆蟲中腸蛋白的互作，以明確其在昆蟲中腸的作用靶點，為分子設(shè)計此類蛋白以提高毒力和擴大殺蟲譜提供科學(xué)的理論依據(jù)。

本發(fā)明所構(gòu)建的融合蛋白 EAMM 能在大腸桿菌中穩(wěn)定大量表 達，經(jīng)純化得到純度較高的蛋白;構(gòu)建的亞單位疫苗免疫動物能產(chǎn)生 針對結(jié)核桿菌特定抗原(ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4 和 PPD)的特異 性的細胞免疫和體液免疫應(yīng)答，具有較強的免疫原性。EAMM 亞單 位疫苗加強免疫后的結(jié)核菌載量明顯少于 PBS 組和僅 BCG 免疫組， 表明清除結(jié)核分枝桿菌的能力較強。從組織切片 HE 染色

采用高效預(yù)處理、低溫酶萃取、鹽析和膜分離等成套技術(shù)，從新鮮動物皮、魚皮、魚鱗等不同原料中制備未變性膠原蛋白，解決了獲取大量高純度、未變性的化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原的技術(shù)難題；掌握了通過物理與化學(xué)改性手段調(diào)控未變性膠原的熱穩(wěn)定性、流變學(xué)等性能的方法和原理，為未變性化妝品用和醫(yī)用膠原的產(chǎn)業(yè)化利用提供了技術(shù)支撐。目前，化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原蛋白生產(chǎn)技術(shù)已分別在成都新際生物活性膠原開發(fā)有限公司和廣東勝馳生物科技有限公司成功實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)與天然膠原標(biāo)準(zhǔn)品一致，經(jīng)濟效益顯著，具有較強的市場競爭力。

本發(fā)明公開了一種新型的酸化蛋白飼料補充料，所述酸化蛋白飼料補充料由檸檬酸菌絲體、玉米蛋白粉和營養(yǎng)調(diào)控劑以質(zhì)量比為1：1～2：0.05～0.1組成；所述營養(yǎng)調(diào)控劑為碳酸鈣、賴氨酸和酵母培養(yǎng)物以質(zhì)量比1：0.5～1：3～5構(gòu)成；本發(fā)明新型的酸性蛋白飼料補充料不僅大大提高其蛋白含量，而且具有酸香味，適口性好，能明顯改善畜禽胃腸道環(huán)境、維持動物腸道優(yōu)勢菌群，減少仔豬腹瀉率，提高畜禽生產(chǎn)性能；酸化蛋白飼料補充料應(yīng)用方便，可以直接等量替代畜禽配合飼料中的玉米和豆粕，替代上限為20%，不需要另行調(diào)整配方，就能保持原有營養(yǎng)水平和生產(chǎn)性能。

本發(fā)明所構(gòu)建的融合蛋白EAMM能在大腸桿菌中穩(wěn)定大量表達，經(jīng)純化得到純度較高的蛋白；構(gòu)建的亞單位疫苗免疫動物能產(chǎn)生針對結(jié)核桿菌特定抗原（ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4和PPD）的特異性的細胞免疫和體液免疫應(yīng)答，具有較強的免疫原性。