細胞互作的原位捕獲技術
                                        
                                            	不同細胞之間的相互作用和信息傳遞在包括	免疫	響應	、	器官	發育、神經傳導	在內的眾多生命活動中都扮演	著	關鍵角色	。目前,	研究	細胞互作	的方法	大	都	需要	已知參與	的	細胞類型	,難以在復雜的活體環境下發現或研究未知的細胞	間	相互作用	。	為了解決這一難題,陳鵬課題組	借助“定向進化”技術和“	鄰近標記	”策略,實現了	細胞	之間	動態相互作用的	原位捕獲。這一被命名為	EXCELL	(	Enzyme-	m	ediated proximal cell labeling	)	的技術,通過將	作者	定向進化得到的分選酶(	mg	SrtA	)	展示在	待研究的	細胞表面,	能夠對與其	相互作用	的	細胞	進行原位捕獲與鑒定	,為研究細胞	-	細胞相	互作用提供了有力的工具	。	源自	金黃色葡萄球菌	的	分選酶	Sortas	e	 A	 	(	SrtA	)	能夠	催化	分選肽	(	LPETG	)	和寡聚甘氨酸	的	共價連接。近期有文獻報道將	SrtA	用于監測小鼠體內特定受體	-	配體介導的免疫	細胞互作	過程	1	。但是該方法	需要將	SrtA	與	寡聚甘氨酸分別融合在相互作用	的	配體和受體	細胞	上,	因此需要預知	相互作用的	細胞	類型,并對兩類細胞	同時進行	基因	改造	,因此無法捕捉未知的細胞間相互作用	。本研究突破了這一瓶頸,	建立了	對	SrtA	進行定向進化的高通量	熒光	篩選	平臺,并成功	獲得	了	對單一甘氨酸進行標記的	高活性	SrtA	突變體	-	mgSrtA	,	能夠	實現對	任意	細胞類型的有效標記。
                                        
                                        
                                            北京大學
                                            2021-04-11