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抗M3型受體變構肽抗體測定在干燥綜合征診斷中的應用
干燥綜合征（Sjögren’s Syndrome，SS）是一種以侵及淚腺和唾液腺等外分泌腺為特征的全身性自身免疫疾病。該病最常見的臨床表現為眼干、口干，并可累及肺、腎臟、淋巴系統、血管及肝臟等器官。此病無明顯的地區分布差異，可發生于任何年齡，以40-60歲，特別是絕經后的女性居多，男女之比為1:9。在我國的患病率為0.77%，在老年人群中的患病率高達4%，全國有近800萬患者。
目前在臨床上應用的SS特異性自身抗體，如SSA、SSB抗體，存在敏感性低，易漏診的弊端，不能滿足臨床需求。本團隊經過多年研究發現了可以用于干燥綜合征診斷的血清學特異性抗原—AM3RP，根據該抗原的抗原表位合成的變構肽可以特異性的識別干燥綜合征患者血清中的特異性抗體—抗AM3RP抗體。抗AM3RP抗體在原發性干燥綜合征（pSS）具有很高的敏感性和特異性，其中，IgG型抗AM3RP抗體在pSS患者中的敏感性為84.6%，特異性為92.2%；IgA型抗AM3RP抗體在pSS患者中的敏感性為和特異性分別為46%和87%。基于目前SS在我國患者數量龐大，又缺乏相應的特異性診斷價值高的生物學標志物，本項目臨床應用前景廣闊。
具體實施方式
實施例1 AM3RP的設計及合成
前述的研究工作(1-4)已經證明，從sigma公司購進sf9細胞真核表達的人膽堿能M3型受體蛋白能夠特異性的結合干燥綜合征患者體內的膽堿能M3型受體蛋白抗體，然后通過特定的方法可以將其檢出。本發明的試驗中首先利用Flechsler等(5)報道的固相合成法合成了一條共18個氨基酸的AM3RP。
研究表明：上述AM3RP具有能特異性的識別干燥綜合征患者血清中的特異性抗體的作用，對干燥綜合征的診斷具有重要的意義。
實施例2 AM3RP對干燥綜合征患者血清中抗體的檢測
本研究采用酶聯免疫吸附法（即ELISA法）對干燥綜合征、類風濕關節炎（RA）、系統性紅斑狼瘡（SLE）患者血清中的抗AM3RP抗體進行檢測，以評價該變構肽抗體在各種疾病中的分布。
將AM3RP包被于酶聯免疫吸附微孔板上，與待測血清一起孵育，如果血清中存在抗AM3RP抗體，該抗體會與包被的固相抗原結合，形成抗原-抗體復合物。將未結合的抗體及其它成分沖洗干凈后，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗人IgG抗體（IgG-HRP）一起孵育，此時IgG-HRP與抗原-抗體復合物結合，形成抗原-抗體-酶標抗體復合物，洗去未結合的成分，加入底物，若血清中含有抗AM3RP抗體，則會顯出特定的顏色，且抗體滴度越高顏色越深。加終止液后在450nm波長下測定OD值，根據標準曲線可計算出待檢樣本的抗AM3RP抗體濃度。
檢測原理示意圖見圖1。
圖一：抗AM3RP抗體檢測示意圖
本項目目前處于商品試劑盒制備階段。
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